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大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-2924 大鼠白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品概述
本試劑盒采用雙抗體夾心法，用于定量檢測大鼠血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中的白三烯B4(LTB4)水平。LTB4是花生四烯酸代謝產(chǎn)物，在炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用?1。
二、檢測原理
?包被抗體?：微孔板預(yù)包抗大鼠LTB4單克隆抗體?1?樣本孵育?：樣本中的LTB4與包被抗體結(jié)合
?酶標(biāo)抗體?：加入生物素化的檢測抗體形成復(fù)合物?2?顯色反應(yīng)?：加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素，TMB底物顯色?1?終止反應(yīng)?：加入終止液終止反應(yīng)
?檢測?：450nm波長測定吸光度(OD值)，濃度與OD值呈正相關(guān)?1三、試劑盒組成
組分規(guī)格保存條件
預(yù)包被微孔板96孔2-8℃
標(biāo)準(zhǔn)品(凍干)6管(1000-0pg/mL)-20℃
樣本稀釋液15mL室溫
生物素化抗體(100×)120μL-20℃
酶標(biāo)復(fù)合物12mL2-8℃
TMB顯色液(A/B)各6mL2-8℃避光
終止液12mL室溫
20×洗滌液60mL室溫
四、樣本處理
?血清/血漿樣本?：
使用EDTA/肝素抗凝管采集
2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘
避免溶血樣本，2-8℃保存≤48小時，長期保存需-20℃?2?細(xì)胞培養(yǎng)上清?：
離心去除細(xì)胞碎片
可直接檢測或適當(dāng)稀釋
五、實(shí)驗(yàn)步驟
?試劑準(zhǔn)備?：
洗滌液：用蒸餾水1:20稀釋濃縮液?2標(biāo)準(zhǔn)品：用樣本稀釋液配制梯度濃度(1000-0pg/mL)
酶標(biāo)抗體工作液：按說明書比例稀釋
?操作流程?：
加樣(100μL/孔) → 37℃孵育90分鐘 → 洗滌4次
加酶標(biāo)抗體(100μL/孔) → 37℃孵育60分鐘 → 洗滌4次
加TMB顯色液(100μL/孔) → 避光顯色15-20分鐘
加終止液(50μL/孔) → 10分鐘內(nèi)測定OD值
六、技術(shù)參數(shù)
?檢測范圍?：62.5-1000pg/mL
?靈敏度?：≤1.0pg/mL
?精密度?：批內(nèi)CV<10%，批間CV<15%
?回收率?：85%-115%
?特異性?：與結(jié)構(gòu)類似物無交叉反應(yīng)
七、注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)前所有試劑需平衡至室溫
以防試劑間交叉污染，使用一次性槍頭
顯色反應(yīng)時間需嚴(yán)格控制，避免過度顯色
酶標(biāo)儀需提前預(yù)熱，建議使用雙波長(450/630nm)檢測
本產(chǎn)品僅用于科研，不用于臨床診斷
八、儲存條件
未開封試劑盒：2-8℃保存，有效期6個月
開封后組分：按說明書要求分別保存
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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