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大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒實驗原理
大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)ELISA試劑盒的實驗原理主要基于?雙抗體夾心法?，通過特異性抗體捕獲目標蛋白并顯色定量。以下是詳細解析：
一、核心檢測原理
抗體包被?
試劑盒預(yù)包被抗Ki-67蛋白的單克隆抗體于酶標板微孔中，形成固相捕獲層?。
抗原-抗體結(jié)合?
樣本或標準品中的Ki-67蛋白與包被抗體特異性結(jié)合，形成“抗體-抗原"復(fù)合物?。
信號放大?
加入生物素標記的二抗(抗Ki-67多克隆抗體)，與已結(jié)合的抗原形成“抗體-抗原-二抗"復(fù)合物?。
通過鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶(SA-ABC)系統(tǒng)進一步放大信號?。
顯色與定量?
加入TMB顯色底物后，酶催化反應(yīng)生成藍色產(chǎn)物，終止液變黃，在450nm波長下檢測吸光度(OD值)，Ki-67濃度與OD值呈正比?。
二、關(guān)鍵組分與流程
試劑盒組分?：包被抗體、生物素化二抗、SA-ABC復(fù)合物、TMB底物、終止液等?。
操作步驟?：
樣本稀釋與加樣
37℃孵育(通常1小時)
洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)
加入二抗與SA-ABC復(fù)合物
顯色反應(yīng)后終止并讀數(shù)
三、技術(shù)特點
高特異性?：雙抗體夾心法可減少交叉反應(yīng)，提高檢測準確性?。
靈敏度?：檢測范圍通常為0.312-20ng/mL，適用于低豐度蛋白檢測?。
標準化?：需通過標準曲線計算樣本濃度，確保結(jié)果可比性?。
四、注意事項
樣本處理?：避免反復(fù)凍融，建議使用新鮮組織或血清樣本?。
干擾因素?：高濃度內(nèi)源性生物素或異嗜性抗體可能影響結(jié)果，需通過稀釋或阻斷劑處理?。
注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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