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大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒實驗原理
發(fā)布時間:2025/9/19瀏覽:97次
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  一、核心原理:雙抗體夾心法

  包被

  實驗開始前,96孔微孔板的孔內(nèi)壁已經(jīng)預(yù)先包被了一種高度特異性的捕獲抗體。這種抗體是針對大鼠胰島素受體β (ISR-β) 分子上的一個特定抗原表位的。

  這些抗體牢固地吸附在塑料板表面,用于“捕獲"后續(xù)步驟中的目標蛋白。

  加樣與結(jié)合

  將您的待測樣本(如大鼠的血清、血漿、細胞裂解液或組織勻漿)加入到微孔中。

  如果樣本中含有大鼠ISR-β蛋白,它會被孔板上的捕獲抗體特異性地捕捉并固定住。

  洗滌:洗去所有未被結(jié)合的蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)。

  加檢測抗體

  加入另一種檢測抗體。這種抗體同樣針對大鼠ISR-β分子,但識別的是另一個不同的抗原表位。

  因此,它能與已被捕獲的ISR-β蛋白結(jié)合,形成 “捕獲抗體-抗原-檢測抗體"的“三明治"復合物。

  再次洗滌:洗去所有未結(jié)合的檢測抗體。

  加酶標記物

  加入一種酶標記的二抗(例如,辣根過氧化物酶-HRP標記的鏈霉親和素-Streptavidin,如果檢測抗體是生物素-Biotin標記的)。這個二抗會特異性地與檢測抗體結(jié)合。

  此時,復合物變?yōu)?“捕獲抗體-抗原-檢測抗體-酶標記二抗" 。

  第三次洗滌:洗去所有未結(jié)合的酶標記物。此時,孔中留下的酶量就與樣本中ISR-β的量直接相關(guān)。

  加底物顯色

  加入酶的無色底物(如TMB)。留在孔中的酶(如HRP)會催化底物發(fā)生化學反應(yīng),生成藍色的產(chǎn)物。

  終止與測定

  加入終止液(通常是稀硫酸)來終止酶促反應(yīng)。反應(yīng)液的顏色會由藍色變?yōu)榉€(wěn)定的黃色。

  立即使用酶標儀在450 nm波長下測量各孔的光密度值(Optical Density, OD值)。

  二、定量原理:標準曲線

  顏色的深淺(OD值的高低)與孔中結(jié)合的酶量成正比,而酶量又與樣本中ISR-β的含量成正比。

  為了實現(xiàn)精確定量,試劑盒會提供一系列已知濃度的ISR-β標準品。將這些標準品與待測樣本在同一塊板上同時進行操作。

  以標準品的濃度為橫坐標(X軸),以其對應(yīng)的OD值為縱坐標(Y軸),繪制出一條標準曲線。

  最后,將待測樣本的OD值代入這條標準曲線,即可計算出樣本中大鼠ISR-β的精確濃度。

  原理總結(jié)流程圖:

  包被捕獲抗體 → 加入樣本(ISR-β被捕獲) → 洗滌 → 加入檢測抗體 → 洗滌 → 加入酶標記二抗 → 洗滌 → 加入底物顯色 → 終止反應(yīng) → 測定OD值 → 通過標準曲線計算濃度

  注:以上僅供參考,科研使用,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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