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以下是?大鼠骨特異性堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒?的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書，綜合操作流程、注意事項(xiàng)及技術(shù)要點(diǎn)：
BS-3487 大鼠骨特異性堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理?
采用?雙抗體夾心法?：
包被微孔板的大鼠ALP捕獲抗體與樣本中的ALP結(jié)合?。
加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"復(fù)合物?。
TMB顯色，顏色深淺與ALP濃度正相關(guān)，450nm測(cè)OD值?。
二、樣本處理?
血清/血漿?：
采集后3000rpm離心10-20分鐘，避免溶血?。
抗凝劑可選EDTA、肝素或檸檬酸鹽?。
組織勻漿?：
加入PBS勻漿，3000rpm離心10分鐘取上清?。
細(xì)胞上清液?：
離心去除顆粒，避免反復(fù)凍融?。
保存?：
短期存于2-8℃，長(zhǎng)期需-20℃保存，避免多次凍融?。
三、操作步驟?
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：
按說(shuō)明書梯度稀釋(如40IU/L→2.5IU/L)?。
加樣?：
空白孔不加樣，標(biāo)準(zhǔn)孔加50μl標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔先加40μl稀釋液+10μl樣本(5倍稀釋)?。
溫育?：
37℃孵育30分鐘，封板膜密封?。
洗滌?：
用稀釋后的洗滌液洗板5次，拍干?。
加酶標(biāo)抗體?：
每孔50μl(空白孔除外)，37℃復(fù)育30分鐘?。
顯色與終止?：
依次加入顯色劑A/B各50μl，避光顯色15分鐘，終止液50μl終止反應(yīng)?。
檢測(cè)?：
450nm測(cè)OD值，15分鐘內(nèi)完成?。
四、注意事項(xiàng)?
試劑準(zhǔn)備?：
使用前平衡至室溫(15-30分鐘)，濃縮洗滌液需37℃助溶?。
加樣精度?：
使用校準(zhǔn)加樣器，避免孔壁接觸，5分鐘內(nèi)完成加樣?。
質(zhì)量控制?：
每次實(shí)驗(yàn)需做標(biāo)準(zhǔn)曲線及復(fù)孔，樣本OD值超標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)需稀釋?。
干擾因素?：
避免使用NaN3(抑制HRP活性)或高脂樣本?。
五、結(jié)果計(jì)算?
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線，擬合方程計(jì)算樣本ALP濃度?。
以上操作需嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書，不同批次可能存在差異?。
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