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大鼠P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
發(fā)布時(shí)間:2025/4/2瀏覽:392次
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  大鼠P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書主要包括以下內(nèi)容:

  BS-3514  大鼠P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)ELISA試劑盒

  1. 實(shí)驗(yàn)原理

  該試劑盒采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。通過抗大鼠P450 scc單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的P450 scc與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠P450 scc,形成免疫復(fù)合物連接在板上。辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,最后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,P450 scc濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中P450 scc濃度?。

  2. 試劑盒組成

  試劑盒包含以下組分(2-8℃保存):

  標(biāo)準(zhǔn)品液

  生物素化的抗大鼠P450 scc

  辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin

  底物工作液

  終止液硫酸?。

  3. 樣本處理及保存

  血清/血漿?:收集后2-8℃保存48小時(shí),更長(zhǎng)時(shí)間需冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融?。

  細(xì)胞培養(yǎng)上清液/組織勻漿?:盡早檢測(cè),保存條件同上?。

  4. 實(shí)驗(yàn)步驟

  準(zhǔn)備試劑?:將試劑移至室溫平衡至少30分鐘?。

  加樣?:分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔和待測(cè)樣本孔,每孔加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣本100μL,37℃溫育2小時(shí)?。

  洗滌?:棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡2分鐘?。

  加生物素標(biāo)記抗體?:每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100μL,37℃溫育1小時(shí)?。

  加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素?:每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液100μL,37℃溫育1小時(shí)?。

  顯色?:每孔加底物溶液90μL,37℃避光顯色15-30分鐘?。

  終止反應(yīng)?:每孔加終止溶液50μL,終止反應(yīng)?。

  讀板?:用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔的OD值?。

  5. 注意事項(xiàng)

  避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸請(qǐng)盡快用水沖洗?。

  實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品?。

  使用一次性吸頭避免交叉污染?。

  洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水?。

  底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子;底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下?。

  6. 結(jié)果計(jì)算

  通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)OD值計(jì)算樣品中P450 scc的濃度?。

  7. 適用范圍

  該試劑盒適用于體外定量檢測(cè)血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中P450 scc的濃度,僅用于科研實(shí)驗(yàn),禁用于臨床?。

  以上內(nèi)容綜合了多個(gè)相關(guān)網(wǎng)頁的信息,確保實(shí)驗(yàn)操作的準(zhǔn)確性和安全性?。

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